La maggior parte dei componenti cellulari sono incolori e non possono essere chiaramente distinti al microscopio. La premessa di base della microscopia a fluorescenza è la colorazione dei componenti con coloranti.
I coloranti fluorescenti, noti anche come fluorofori o coloranti fluorescenti, sono molecole che assorbono la luce di eccitazione di una determinata lunghezza d'onda (solitamente UV) ed emettono luce di una lunghezza d'onda maggiore dopo un breve ritardo. Il ritardo tra l'assorbimento e l'emissione è trascurabile, tipicamente dell'ordine dei nanosecondi.
La luce emessa può quindi essere filtrata dalla luce di eccitazione per rivelare la posizione del fluoroforo.
La microscopia a fluorescenza utilizza una luce più intensa per illuminare il campione. Questa luce eccita il materiale fluorescente nel campione, che quindi emette luce a una lunghezza d'onda maggiore.
L'immagine risultante si basa sulla lunghezza d'onda di emissione di una seconda sorgente luminosa o di una sostanza fluorescente diversa dalla luce originariamente utilizzata per illuminare ed eccitare il campione.
in lavorazione
La luce alla lunghezza d'onda di eccitazione viene focalizzata sul campione attraverso la lente dell'obiettivo. La fluorescenza emessa dal campione viene focalizzata sul rilevatore attraverso la lente dell'obiettivo. Poiché la maggior parte della luce di eccitazione viene trasmessa attraverso il campione, solo la luce di eccitazione riflessa raggiunge l'obiettivo insieme alla luce emessa.
modulo
"Microscopia a fluorescenza" si riferisce a qualsiasi microscopio che utilizza la fluorescenza per generare immagini, sia che si tratti di un dispositivo più semplice come un microscopio a epifluorescenza, o di un design più complesso come un microscopio confocale, che utilizza il sezionamento ottico per ottenere una migliore risoluzione. Immagine in fluorescenza.
La maggior parte dei microscopi a fluorescenza utilizzati sono microscopi a epifluorescenza, in cui l'eccitazione dei fluorofori e la rilevazione della fluorescenza vengono eseguite attraverso lo stesso percorso ottico (cioè attraverso la lente dell'obiettivo).
