Componenti tipici di amicroscopio a fluorescenzaSono:
Coloranti fluorescenti (fluorofori)
Un fluoroforo è un composto fluorescente che emette nuovamente luce quando eccitato dalla luce.
I fluorofori contengono tipicamente diversi gruppi aromatici legati o sono molecole planari o cicliche con diversi legami π.
Molti coloranti fluorescenti sono stati progettati per molte biomolecole.
Alcune di queste sono piccole molecole che sono intrinsecamente fluorescenti e legano la biomolecola di interesse. I primi esempi di questi sono le colorazioni dell'acido nucleico come DAPI e Hoechst, falloidina, che vengono utilizzate per colorare le fibre di actina nelle cellule dei mammiferi.
fonte di luce
Vengono utilizzati quattro tipi principali di sorgenti luminose, comprese le lampade ad arco allo xeno o le lampade al mercurio con filtri di eccitazione, laser e LED ad alta potenza.
I laser sono utilizzati principalmente nelle sofisticate tecniche di microscopia a fluorescenza, mentre le lampade allo xeno, le lampade al mercurio e i LED con filtri di eccitazione dicroici sono comunemente utilizzate nella microscopia a fluorescenza ad ampio campo.
Filtro di eccitazione
L'eccitatore è tipicamente un filtro passa-banda che lascia passare solo le lunghezze d'onda assorbite dal fluoroforo, riducendo così al minimo l'eccitazione da altre sorgenti fluorescenti e bloccando la luce di eccitazione nella banda di emissione della fluorescenza.
specchio dicroico
Un filtro dicroico o filtro a film sottile è un filtro colorato molto preciso utilizzato per riflettere selettivamente la luce in una piccola gamma di colori mentre riflette altri colori.
Filtro delle emissioni.
L'emettitore è solitamente un filtro passa banda che lascia passare solo la lunghezza d'onda emessa dal fluoroforo e blocca tutta la luce indesiderata all'esterno di questa banda, in particolare la luce di eccitazione.
I filtri garantiscono un background minimo filtrando l'energia di eccitazione indesiderata (inclusi UV e IR) o l'autofluorescenza del campione e del sistema.
