Per la microscopia a fluorescenza, il campione emette luce. Che ne dici? Aggiungendo molecole di colorante al campione. La molecola del colorante è tipicamente eccitata quando assorbe energia luminosa, quindi rilascia l'energia catturata come luce. L'energia luminosa rilasciata da una molecola eccitata ha una lunghezza d'onda maggiore della luce che irradia. Le molecole di colorante sono tipicamente coloranti fluorescenti che emettono fluorescenza quando esposti a una specifica lunghezza d'onda della luce. L'immagine formata proviene da un'etichetta colorante fluorescente che emette luce
Il principio alla base di questo meccanismo di funzionamento è che un microscopio a fluorescenza espone un campione alla luce ultravioletta o ultravioletta o alla luce blu, formando così un'immagine del campione emessa dalla fluorescenza. Hanno una lampada ad arco a vapori di mercurio che produce un intenso fascio di luce che passa attraverso un filtro di eccitazione. La funzione del filtro di eccitazione è quella di trasmettere lunghezze d'onda specifiche sul campione colorato con colorante fluorescente, producendo così un'immagine dell'etichetta con colorante fluorescente.
Dopo la lente dell'obiettivo è presente un filtro barriera il cui scopo principale è quello di eliminare eventuali radiazioni UV che potrebbero essere dannose per la luce dell'osservatore, riducendo così il contrasto dell'immagine.
Applicazioni diMicroscopia a fluorescenza
Per visualizzare agenti batterici come Mycobacterium tuberculosis.
Utilizzato nelle tecniche di immunofluorescenza per identificare anticorpi specifici prodotti contro antigeni/patogeni batterici marcando gli anticorpi con coloranti fluorescenti.
Utilizzato nella ricerca ecologica per identificare e osservare microrganismi marcati con coloranti fluorescenti
Può anche distinguere tra batteri vivi e morti in base al colore che emettono quando trattati con un colorante speciale
Oltre ai microscopi discussi sopra, esiste un microscopio meno comunemente usato chiamato microscopia a contrasto di interferenza differenziale. È molto simile alla microscopia a contrasto di fase, in cui l'immagine è formata da raggi luminosi deflessi o non deflessi. La differenza è che qui due fasci di luce vengono lanciati sul campione e focalizzati da un prisma. Un raggio passa attraverso il prisma per raggiungere il campione, mentre l'altro raggio passa attraverso un'area trasparente del vetrino senza il campione. I due raggi poi si fondono e interferiscono tra loro per formare un'immagine. Può essere utilizzato per visualizzare le strutture cellulari di campioni non colorati, come endospore, pareti cellulari batteriche, nuclei e granuli.
